動物細胞培養的一般步驟是什麼 動物細胞培養的步驟簡介

1、復甦，把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化後（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超淨工作台裏。把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鐘。把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前後左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分佈。標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到CO2培養箱中培養，細胞貼壁後換培養基。3天換一次培養基。

2、傳代，培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。把原有培養基吸掉。加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鐘。細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。

3、凍存，把細胞消化下來並離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然後放到液氮灌中保存。凍存液的配製：70%的完全培養基 20??%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。